Descripción del Proyecto:
“Hasta la fecha, no hay una prueba precisa de VIH en el punto de atención para recién nacidos o adultos con infección aguda. El diagnóstico oportuno es vital para el inicio temprano de la terapia antirretroviral, que puede suprimir significativamente la infección y mejorar las tasas de supervivencia. Este proyecto presenta un sistema de amplificación de ácido nucleico isotérmico rápido capaz de realizar el diagnóstico de VIH en el punto de atención a partir de muestras de crudo.
Los elementos de la lisis térmica, la amplificación de la recombinasa polimerasa (RPA) y la detección de la banda inmunocromatográfica (ICS) se combinaron para crear un ensayo autónomo que posee la sensibilidad necesaria para diagnosticar la enfermedad en su etapa aguda. Este proyecto describe una estrategia que es: (1) capaz de realizar amplificación isotérmica y detección de ADN y ARN del VIH; (2) equipado para diagnosticar ácidos nucleicos virales utilizando muestras crudas, no preparadas; y (3) fácilmente adaptable para la integración en un formato de microdispositivo. El ensayo RPA-ICS fue capaz de amplificar y detectar secuencias de VIH, produciendo una señal de punto final robusta. Se demostró que el sistema detecta con éxito el ADN del VIH en muestras que contienen una concentración del 4% de células codificadas por el genoma del VIH, células no infectadas, proteínas y otros constituyentes de la sangre entera con una mínima preparación de muestras frontales. Para su uso en un entorno de punto de atención, se concibió un microdispositivo que incorporaba todos los pasos del ensayo utilizando un software de diseño asistido por computadora. Este dispositivo es capaz de analizar muestras sin manipulación externa o acceso a equipos especializados. Gracias a su naturaleza rápida, isotérmica y autónoma, el sistema descrito aquí proporciona resultados de prueba de concepto para respaldar el desarrollo de una prueba exitosa basada en ácido nucleico de VIH en el punto de atención “.
