¿Por qué no se puede usar la desnaturalización por calor en lugar de NaOH durante la extracción de un plásmido bacteriano?

La extracción de plásmidos bacterianos puede utilizar múltiples metodologías para separar el ADN bicatenario. El calor hace lo mismo que el NaOH porque desnaturaliza el ADN bicatenario en ADN monocatenario. Entonces, la conclusión es que puede usar calor para desnaturalizar el ADN del plásmido bacteriano en lugar del NaOH para la extracción del ADN del plásmido.

La verdadera pregunta es la eficiencia, me atrevería a adivinar que la desnaturalización térmica es mucho menos eficiente que una extracción basada en productos químicos. Un método de desnaturalización de base térmica requiere tiempo para calentarse y enfriarse, mientras que el método químico es casi instantáneo cuando la solución se neutraliza. Desea un “crash” rápido de la solución que dé como resultado la reticulación y la agregación de su ADN genómico contaminante, de modo que se caiga fácilmente de la solución.

Además, hay otros componentes de los tampones de extracción de lisis alcalina que facilitan una extracción eficaz de ADN de plásmido, tales como SDS y sales.

Sí puede. He usado ese protocolo muchas veces. Lo llamamos la “preparación en ebullición”. No estoy seguro de si ese es el nombre oficial. De todos modos, obtienes ADN de muy buena calidad.

Analytical Biochemistry , volumen 114, número 1, junio de 1981, páginas 193-197

Un método de ebullición rápida para la preparación de plásmidos bacterianos

David S. Holmes. Michael Quigley.

Si tiene la intención de hacer una PCR, hay una manera aún más rápida de saltear la preparación (y la extracción de isopropanol) y pasar directamente a la PCR.