Un método es debilitar o reducir la cantidad de pared celular en la bacteria.
¿Por qué debilitar la pared celular?
Las bacterias Gram-positivas tienen una pared celular, y esta pared celular se considera una barrera en la transformación de bacterias Gram-positivas [1]. Es decir, la pared celular es una barrera física que un plásmido debe cruzar antes de que pueda entrar en una bacteria. La reducción de esta barrera, entonces, conduce a una mayor transformación [2].
¿Cómo se puede debilitar la pared celular?
Hay muchos métodos químicos que pueden usarse para debilitar la pared celular. Esta respuesta se centra en la lisozima, que digiere enzimáticamente la pared celular, y la penicilina, que inhibe la síntesis de la pared celular. El tratamiento de las bacterias con estos agentes puede debilitar la pared celular.
Sin embargo, tanto la lisozima como la penicilina son bactericidas y pueden causar la muerte de la bacteria a dosis suficientemente altas. Además, a dosis suficientemente bajas, los agentes aún debilitan la pared celular.
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Entonces es necesario encontrar una cantidad óptima que reduzca la pared celular sin comprometer la viabilidad de las células que intentan transformarse.
Para la electroporación de Arthrobacter [3], estas concentraciones y efectos óptimos sobre la transformación se hacen aparentes:
En C y D , las bacterias en el experimento fueron tratadas antes de la electroporación. En E , el grupo de lisozima corresponde al tratamiento con 4 μg / ml antes de la electroporación, y el grupo de pencillina corresponde a 30 μg / ml antes de la electroporación.
En general, la pared celular se presenta como una barrera física para la transformación, y el debilitamiento de esta barrera puede aumentar la eficiencia de la transformación. Los agentes químicos, como la lisozima y la penicilina, pueden debilitar la pared celular al digerir la pared celular o inhibir su síntesis, respectivamente. Sin embargo, demasiado débil de una pared celular reduce la viabilidad de las bacterias, por lo que la concentración de estos agentes de debilitamiento debería optimizarse en el protocolo de transformación.
Notas a pie de página
[1] Método de transformación de cuentas de vidrio para bacterias gram-positivas
[2] Metodologías para aumentar las eficiencias de transformación y el rango de bacterias que pueden transformarse
[3] Optimización de las condiciones de electroporación para Arthrobacter con plásmido PART2
