Medí la fluorescencia de GFP en poblaciones de E. coli con el tiempo usando un lector de placas Tecan Genios. Noté que se produjeron grandes caídas en los niveles de fluorescencia durante las primeras 5 horas de medición antes de que las curvas de crecimiento basadas en fluorescencia comenzaran a subir. ¿Qué podría estar causando este fenómeno?

Algunas reflexiones sobre esto:

Considere la posibilidad de que haya dos (o más) procesos que ocurran simultáneamente. Si uno fuera un colapso en la señal de fluorescencia (podría ser por temple, fotoblanqueo, escisión proteolítica, etc.) que es, por ejemplo, de naturaleza lineal, y otro es el aumento logarítmico de la producción total a través del crecimiento de la bacteria, entonces esto podría producir los efectos que observas También piense qué pasaría si tiene una población mixta de bacterias con respecto al número de copias del plásmido. Presumiblemente, ¿está utilizando alguna selección de antibióticos para mantener el plásmido? ¿Por qué está utilizando GFP para controlar el crecimiento? ¿Es mucho más fácil simplemente observar la turbidez? La fluorescencia de GFP liberada de células muertas también puede ser mucho más alta que GFP dentro de las células (enfriamiento rápido). La disminución puede corresponder a la fase de retraso de crecimiento donde (a pesar de la inducción previa) se gasta más energía en procesos que no sean la producción de proteínas recombinantes. ¿Qué tipo de sistema de inducción / inducción está usando? La dilución de los medios sin mantener la concentración del inductor también tendrá algunos efectos raros. Esta es una pregunta complicada con información insuficiente para responder adecuadamente, pero espero que lo anterior le brinde algunos puntos de partida para la investigación. ¡Buena suerte!

Deberá proporcionar más detalles para reducir el rango de posibilidades. ¿Estás probando la expresión? ¿Qué gen? ¿Estás viendo la supresión de la tasa de crecimiento durante las primeras cinco horas en comparación con una cepa sin el vector? ¿Estás controlando la autofluorescencia?

No puedo pensar en una posible razón para esto a partir de la descripción que ha proporcionado; aunque yo no soy un experto en Microbiología.

Debería publicar preguntas basadas en experimentos científicos en sitios como Mendeley o ResearchGate.

Buena suerte.