¿Funciona el promotor T5 en Burkholderia cepacia?

No sé la respuesta y no puedo encontrar un ejemplo de expresión de proteína en Burkholderia spp. que usa el promotor T5. Sin embargo, una forma de averiguarlo sería buscar el motivo del promotor T5 en los bacteriófagos de Burkholderia , bioinformáticamente. Aquí hay algunos archivos de Burkholderia phage genbank (aunque puede encontrarlos en NCBI si lo desea):

burkholderia_phages.gb

Quizás alguien haya caracterizado molecularmente a los promotores bacterianos o de fagos de Burkholderia y simplemente podría comparar las secuencias que identificaron con el promotor T5. No es un enfoque directo, pero podría ofrecer alguna idea. Para alternativas al promotor T5 que se han probado en Burkholderia spp., Ver:

Los vectores Shuttle basados ​​en PBAD para el análisis funcional de genes tóxicos y altamente regulados en Pseudomonas y Burkholderia spp. y otras bacterias

Por el contrario, se usa un promotor de Burkholderia para la expresión heteróloga en Escherichia coli :

Uso de promotores ribosómicos de Burkholderia cenocepacia y Burkholderia cepacia para una mejor expresión de la proteína transportadora en Escherichia coli

Aquí hay otro promotor caracterizado molecularmente de Burkholderia :

Revistas de la Sociedad de Microbiología | Análisis de la transcripción del locus bph de Burkholderia sp. cepa LB400 y evidencia de que el producto del gen ORF0 actúa como un regulador del promotor bphA1

Por último, si está buscando un promotor de amplio espectro y una secuencia de RBS, considere buscar los promotores y las secuencias de RBS encontradas en plásmidos de amplio rango de hospedadores del RSF1010 (grupo de incompatibilidad IncQ) y plásmidos RP4 / RK2 (grupo de incompatibilidad IncP ) Por ejemplo, esta publicación miró explícitamente a los promotores en RK2:

Promotores del Amplio Rango de Acogida Plásmido RK2: Análisis de la Transcripción (Iniciación) en Cinco Especies de Gram-Negative Bacteria

También le puede interesar este artículo sobre riboswitches sintéticos probados en bacterias gramnegativas múltiples:

Riboswitches sintéticos que inducen la expresión génica en diversas especies bacterianas

Trabajé con Burkholderia ( entonces Pseudomonas ) cepacia por años, hace mucho tiempo. Los promotores que funcionaban en E. coli generalmente no funcionaban, aunque los que trabajaban en Pseudomonas putida con mayor frecuencia lo hacían. Revise el trabajo de estos autores, ya que parece que tenían T5 operando en un nivel inferior (probablemente debido a un sesgo de codones) en putida:

Xijun Hu, Po Lock Yue – 2000 – Tecnología e ingeniería

… y Dobberstein B., un sistema de transcripción-traducción basado en el promotor T5 para el análisis de proteínas in vitro e in vivo. … Un monobromoacetato deshalogenasa de Pseudomonas cepacia MBA4.