En Microbiología, ¿cuál es el propósito de subcultivar?

El proceso de subcultivo implica la transferencia de microbios de un contenedor de crecimiento a otro, proporcionando a los microbios un nuevo suministro de nutrientes en un medio sólido o líquido. El subcultivo permite al analista cambiar los parámetros del hábitat de un microbio, como su temperatura y entorno físico, para obtener información utilizada en la identificación de especies. Comprender dónde vive o muere una cultura microbiana ayuda a aislar su cepa. En algunos casos, se puede identificar un cultivo microbiano en función del tiempo necesario para que aparezca un nuevo crecimiento después de la transferencia del subcultivo.

Las placas de Petri con agar, una sustancia gelatinosa hecha de algas marinas, se usan como un ambiente sólido para cultivar microorganismos. Cuando se necesita un ambiente líquido, se usa un caldo de nutrientes artificiales. Las culturas con microorganismos mixtos que se cultivan en un caldo deben ser subcultivadas en un medio sólido para aislar las colonias para una identificación precisa. Una vez en la superficie del agar, cada colonia microbiana representa una sola especie de microorganismo, que se origina de la multiplicación de una sola célula. Esta colonia definida y aislada se llama cultura pura y es un punto de partida esencial en la investigación microbiológica.

Los cultivos microbianos deben subcultivarse regularmente después de un período de tres meses. El subcultivo se lleva a cabo principalmente a

  1. preservar o mantener la cultura por períodos más largos.
  2. Mantenga su bacteria / aislado / cultivo viable.
  3. mantener la pureza de la cultura

Otros métodos para preservar la cultura son

  1. Existencias de glicerol.
  2. Sobrecapa de aceite mineral.
  3. Liofilización.

Las líneas celulares y microorganismos no pueden mantenerse en cultivo indefinidamente debido al aumento gradual de sustancias tóxicas, el uso de nutrientes y el aumento en el número de células debido al crecimiento. Por lo tanto, el subcultivo se usa para producir un nuevo cultivo con una densidad de células menor que el cultivo de origen, nutrientes frescos y ningún metabolito tóxico que permita el crecimiento continuo de las células sin riesgo de muerte celular. El subcultivo es importante tanto para las células proliferantes como para las que no proliferan.

Típicamente, el subcultivo es de un cultivo de cierto volumen en un medio de crecimiento fresco de igual volumen, esto permite el mantenimiento a largo plazo de la línea celular. El subcultivo en un mayor volumen de medio de crecimiento se usa cuando se quiere aumentar el número de células para, por ejemplo, usar en un proceso industrial o experimento científico.

El objetivo del subcultivo de rutina es mantener un stock de células frescas (viables) que pueda usar para la inoculación. Uno de los problemas con el subcultivo es la deriva genética. Por esta razón, es mejor volver a un stock maestro (como las celdas almacenadas en 30% de glicerol en el congelador).

El subcultivo también se puede usar para adaptar las cepas a condiciones de crecimiento específicas (como el aumento de las cargas de sustrato, para desarrollar tolerancia a los compuestos inhibidores, etc.).

Cuando se mantiene el cultivo en el refrigerador, los organismos tienen la oportunidad de activar su metabolismo y, por lo tanto, es mejor tener subcultivos inclinados del mismo organismo para el crecimiento y el desarrollo. Para evitar esto, puede utilizar la tecnología llamada criopreservación … que lleva a la interrupción completa de la actividad metabólica de los organismos