¿Es posible tener un almacenamiento a largo plazo de un cultivo bacteriano metabólicamente inactivo en medio de crecimiento líquido a 4 grados Celsius?

TL; DR: Sí, podría mantener las endosporas bacterianas inactivas a 4 ° C durante bastante tiempo. Las células vegetativas, sin embargo, no durarán tanto tiempo.

Comencemos definiendo “a largo plazo” como un período de tiempo que excede los 90 días. ¿Suena razonable? También necesitamos definir el estado de su cultura: ¿están sus células en las fases de retraso / registro? Además, ¿de qué especie estamos hablando, aquí? Algo que se divide rápidamente, o algo que crece lentamente, como las micobacterias (¿probablemente tampoco sobreviviría demasiado tiempo, por razones de argumentos)? A los fines de esta pregunta, haré algunas generalizaciones, así que por favor tengan paciencia si no es verdad en todas las circunstancias.

Aquí está el resumen simple: enfriamos los cultivos a 4 ° C para reducir la actividad metabólica y, por extensión, la tasa de agotamiento de nutrientes / formación de productos de desecho en cultivos bacterianos. Esto nos permite mantener células vivas de, por ejemplo, E. coli o S. aureus en agar nutritivo en el refrigerador durante más de una semana (he tenido cultivos viables durante más de 4 semanas, pero eso fue solo porque me olvidé de ellos, y ciertamente no porque tuviera la intención de mantenerlos de esa manera) y aún así mantenerlos viables.

Sin embargo, un medio líquido no es lo mismo que agar nutritivo cuando se mantienen las células en el refrigerador, siendo el medio sólido mucho mejor para mantener las células viables. Este efecto solo se volverá más pronunciado en cultivos líquidos durante periodos más largos, cuando las células bacterianas se asienten en el fondo de tu tubo de cultivo, el intercambio gaseoso con el aire circundante se ralentiza, los nutrientes se agotan, los desechos se acumulan y tus células pierden viabilidad.

Las endosporas, sin embargo, pueden permanecer estables por mucho más tiempo, y no necesariamente deben mantenerse a 4 ° C para mantener la viabilidad. Podrías ponerlos en medio nutriente, pero si no se activan, las esporas no germinarán, y se mantendrán estables por un tiempo bastante largo [1]. Sin embargo, si está buscando almacenar células vegetativas, su mejor opción es agregar glicerol a su cultivo como crioprotector y enviar las células a un congelador para su almacenamiento a largo plazo.

Notas a pie de página

[1] Las endosporas de Bacillus cereus presentan una respuesta heterogénea al tratamiento térmico y al almacenamiento a baja temperatura