¿Cómo inducir el desarrollo de biofilms en cepas modelo E. coli como BL21 (DE3)? Además, ¿cómo puedo lograr esto para otros tipos de bacterias

No sé sobre su cepa, pero no creo que necesite un biorreactor, por lo menos.

En el proyecto en el que estoy trabajando actualmente, tenemos que conocer la capacidad de formación de biopelículas de ciertos organismos. utilizamos la famosa placa de microtitulación para el ensayo. Los pasos son:

  1. Inoculación (5 – 10 microlitros de stock en 195 – 190 microlitros del medio líquido; no olvide tomar en consideración el volumen del pozo)
  2. Incubación durante la noche (24 horas, pero depende de su cultura)
  3. Aplicación de un tinte de su elección
  4. Déjalo absorber por 10 a 15 minutos
  5. Una vez que las biopelículas han absorbido el tinte, lavar suavemente sin aplicar mucha fuerza con solución salina normal 2 – 3 veces
  6. Ahora que todos los organismos suspendidos podrían haberse aclarado, los organismos adheridos a la superficie de los pozos de microtitulación solo quedarían
  7. Verificar la absorbancia usando un lector de placas ELISA usando
  8. La absorbancia observada se puede considerar como una medida de la capacidad de formación del biofilm del organismo

Después de este ensayo, hemos encontrado (cuantitativamente) los posibles candidatos para la formación de biopelícula y luego continuamos.

Si está buscando formación visible, puede considerar utilizar alguna superficie esterilizada (por ejemplo, acero inoxidable) sumergida en el medio líquido con el organismo (en una placa de Petri, tal vez) y luego seguir el mismo proceso que se mencionó anteriormente con algunos cambios evidentes, use un tinte fluorescente y observe con un microscopio fluorescente.

No estoy del todo seguro, pero he observado que incluso las bacterias que no se sabe forman biopelículas lo harían en una cultura que se ha agotado en nutrientes, bastante tiempo después de que la fase estacionaria ha llegado.

Podría intentarlo dejando la cultura en la coctelera con la misma composición de nutrientes que siempre usa, pero se deja durante un tiempo> 5 días o intenta concentrar el cultivo por centrifugación en una cantidad inusualmente grande y luego incubar en un medios sólidos.

Sin garantías